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Product Category1 高(gāo)效液相色譜儀(yí)係(xì)統
液(yè)相色譜(pǔ)儀主要由(yóu)貯液瓶(píng)，泵(bèng)，進樣(yàng)器，柱子，柱溫箱(xiāng)，檢(jiǎn)測(cè)器，數(shù)據處(chǔ)理係統(tǒng)組(zǔ)成(chéng)。對(duì)於整(zhěng)個係統(tǒng)而(ér)言，柱(zhù)子，泵(bèng)和檢(jiǎn)測器(qì)是(shì)核(hé)心部(bù)件(jiàn)同(tóng)時也是(shì)易出(chū)問(wèn)題(tí)的(dí)主要部位(wèi)。
2 常見問(wèn)題及解決方法(fǎ)
高效液(yè)相作(zuò)為(wéi)一種高(gāo)精密(mì)儀(yí)器(qì)，如果(guǒ)在使(shǐ)用過(guò)程中不按照(zhào)正確操作(zuò)的話，就容(róng)易導致一(yī)些問題。其中常見(jiàn)的就是(shì)柱(zhù)壓問(wèn)題(tí)，漂(piāo)移問題(tí)，峰(fēng)型(xíng)異常問題。
1.柱壓(yā)問(wèn)題(tí) 柱(zhù)壓問題(tí)是(shì)使(shǐ)用(yòng)高效(xiào)液(yè)相(xiāng)色(sè)譜(pǔ)過(guò)程中需要密(mì)切注意(yì)的(dí)地方(fāng)，柱(zhù)壓(yā)的(dí)穩(wěn)定(dìng)與色譜(pǔ)圖(tú)峰(fēng)形(xíng)的好壞(huài)，柱(zhù)效，分離(lí)效(xiào)果及保留(liú)時(shí)間等(děng)密切相關。所謂柱壓穩(wěn)定並不(bù)是指(zhǐ)壓力值穩定於一個恒(héng)定值而是指壓力(lì)波(bō)動範圍在50PSI（3.3 Bar）之間（在(zài)使用(yòng)梯度洗脫時(shí)，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化(huà)是允許的(dí)）。壓(yā)力過(guò)高(gāo)，過低(dī)都屬於柱壓問(wèn)題。
壓力過高(gāo)：這(zhè)是(shì)高效(xiào)液相(xiāng)在使(shǐ)用(yòng)中常見的問(wèn)題(tí)，指的是壓(yā)力突然升(shēng)高(gāo)，一般都(dū)是(shì)由於流路(lù)中有堵塞的(dí)原因(yīn)。此時(shí)，我們應該(gāi)分段(duàn)進行檢查(chá)。
(1) .首先斷(duàn)開真(zhēn)空泵(bèng)的(dí)入口處(chǔ)，此時(shí)PEEK管裏充滿(mǎn)液體，使(shǐ)PEEK管低於(yú)溶劑瓶，看液體是(shì)否自由(yóu)滴下，如果液(yè)體(tǐ)不滴或緩(huǎn)慢滴下，則(zé)是溶劑(jì)過(guò)濾頭堵(dǔ)塞(sāi)。處理方(fāng)法：用30%的硝(xiāo)酸(suān)浸(jìn)泡(pào)半(bàn)個(gè)小(xiǎo)時，在用超純水衝(chōng)洗幹淨。如(rú)果液(yè)體自由滴下(xià)，溶(róng)劑過(guò)濾(lǜ)頭正(zhèng)常(cháng)，在(zài)檢(jiǎn)查；
(2).打開(kāi)Purge閥(fá)，使流(liú)動(dòng)相不經過(guò)柱子(zǐ)，如果(guǒ)壓(yā)力沒有(yǒu)明顯(xiǎn)下(xià)降，則(zé)是過濾(lǜ)白(bái)頭(tóu)堵塞。處(chǔ)理方(fāng)法(fǎ)：將過濾白頭(tóu)取(qǔ)出(chū)，用(yòng)10%的(dí)異(yì)丙醇超聲(shēng)半個小時(shí)。如(rú)果壓力降至(zhì)100PSI (6.7 Bar)以下，過濾白(bái)頭(tóu)正常，在(zài)檢(jiǎn)查(chá)；
(3).把(bǎ)色(sè)譜柱出口端取(qǔ)下，如果壓力(lì)不下降(jiàng)，則是(shì)柱(zhù)子(zǐ)堵塞(sāi)。處理方法(fǎ)：如(rú)果是緩(huǎn)衝鹽(yán)堵塞，則用95%的(dí)水衝(chōng)至(zhì)壓力正(zhèng)常。如(rú)果是一些強保留的物(wù)質(zhì)導致(zhì)堵(dǔ)塞(sāi)，則(zé)要(yào)用(yòng)比現(xiàn)在流(liú)動(dòng)相(xiāng)更強(qiáng)的流(liú)動(dòng)相(xiāng)衝至(zhì)壓(yā)力正常(cháng)。假(jiǎ)如(rú)按(àn)上(shàng)麵的(dí)方(fāng)法長時(shí)間衝洗(xǐ)壓(yā)力(lì)都不(bù)下(xià)降(jiàng)，則可考慮(lǜ)將柱(zhù)子的進(jìn)出口(kǒu)反(fǎn)過(guò)來(lái)接(jiē)在(zài)儀(yí)器(qì)上，用(yòng)流動相(xiāng)衝洗柱(zhù)子(zǐ)。這(zhè)時(shí)，如果柱壓(yā)仍不下降(jiàng)，隻(zhī)有(yǒu)換柱子(zǐ)入口篩(shāi)板(bǎn)，但(dàn)一(yī)旦操作(zuò)不甚，很(hěn)容(róng)易(yì)造成(chéng)柱(zhù)效下(xià)降(jiàng)，所以盡量(liáng)少(shǎo)用。
壓力過(guò)低：壓力過低的現(xiàn)象一(yī)般是(shì)由(yóu)於係統泄漏(lòu)，處理方法：尋找各個接口處(chǔ)，特(tè)別是色譜柱(zhù)兩(liǎng)端的接口(kǒu)，把泄漏的地(dì)方(fāng)旋緊(jǐn)即可。當然還有一個(gè)原(yuán)因就(jiù)是(shì)泵裏進(jìn)了空(kōng)氣(qì)，但此時表現(xiàn)的往(wǎng)往(wǎng)是壓(yā)力不(bù)穩，忽(hū)高忽低，更嚴重(zhòng)一點(diǎn)會導(dǎo)致(zhì)泵無(wú)法吸上液體(tǐ)。處(chǔ)理方法：打(dǎ)開Purge閥，用3~5ml/min的(dí)流(liú)速(sù)衝洗(xǐ)，如果不(bù)行，則要(yào)用(yòng)針筒(tǒng)在(zài)排空(kōng)閥(fá)處(chǔ)借住外(wài)力將氣泡吸出。
2.漂移(yí)問題 主要包括基綫(xiàn)漂(piāo)移和保留(liú)時間漂(piāo)移。
2.2.1基(jī)綫漂移(yí)一(yī)般說來(lái)，機(jī)器(qì)剛起(qǐ)動時，基(jī)綫容(róng)易(yì)漂移(yí)，大概要半個小時的平衡時(shí)間，如(rú)果(guǒ)你(nǐ)用了(liǎo)緩(huǎn)衝(chōng)溶液或緩衝鹽(yán)，還(huán)有就(jiù)是在低波長下(xià)（220nm）平(píng)衡(héng)時間相對會(huì)比(bǐ)較長，但如(rú)果(guǒ)你在實驗過程(chéng)中(zhōng)發(fā)現基(jī)綫漂移，則你要考(kǎo)慮下麵(miàn)的(dí)原因(yīn)：
1，柱溫波(bō)動。解(jiě)決(jué)方法：控(kòng)製好柱子(zǐ)和(hé)流(liú)動相的(dí)溫度，檢查(chá)是否有(yǒu)打開(kāi)的(dí)窗戶或空(kōng)調(tiáo)對著柱溫箱。
2，流(liú)通池被汙染(rǎn)或(huò)有氣(qì)體(tǐ)。 解決方法：用(yòng)甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑衝(chōng)洗(xǐ)流(liú)通(tōng)池(chí)（hao斷開柱子）。如(rú)有需要(yào)，可(kě)以(yǐ)用(yòng)1N的(dí)硝酸（不要(yào)用(yòng)鹽酸）。
3，紫(zǐ)外燈能量不(bù)足。解(jiě)決方(fāng)法：更(gēng)換新的紫(zǐ)外燈
4，流動相汙染，變質或(huò)由低品質(zhì)溶(róng)劑(jì)配成(chéng)。解決方(fāng)法(fǎ)：檢(jiǎn)查(chá)流動相的組成(chéng)，使(shǐ)用高品質的(dí)化(huà)學(xué)試劑及HPLC級的(dí)溶劑。
5，樣品(pǐn)中有強保留的(dí)物質（高(gāo)K’值）以(yǐ)饅頭峰樣被洗(xǐ)脫出，從而(ér)表(biǎo)現出(chū)一個(gè)逐步升高(gāo)的基(jī)綫。解決(jué)方法(fǎ)：使(shǐ)用保(bǎo)護(hù)柱(zhù)，如(rú)有必要(yào)，在進(jìn)樣(yàng)之間(jiān)。在分(fēn)析過程中(zhōng)，定期用強溶劑(jì)衝洗(xǐ)柱(zhù)子(zǐ)。
6，檢(jiǎn)測(cè)器(qì)沒有設(shè)定(dìng)在大吸收波長處(chǔ)。解決方法：將波長調整(zhěng)至(zhì)大吸收(shōu)波(bō)長處(chǔ)
7，流動相(xiāng)的PH值(zhí)沒(méi)有調節好(hǎo)。解(jiě)決方法(fǎ)：加(jiā)適(shì)量的(dí)酸(suān)或鹼(jiǎn)調至haoPH值(zhí)
二，.
保留時(shí)間(jiān)漂(piāo)移(yí)保留時(shí)間重現是(shì)液相性(xìng)能好壞的(dí)一個(gè)重(zhòng)要(yào)標(biāo)誌，同(tóng)一(yī)種東(dōng)西，兩次的(dí)保(bǎo)留時(shí)間(jiān)相(xiāng)差(chà)不要超過(guò)15s，超過了(liǎo)半(bàn)分(fēn)鐘(zhōng)可看做保留(liú)時(shí)間漂(piāo)移，就無(wú)法進行定性，你要考慮以下原(yuán)因(yīn)：
1，溫控(kòng)不(bù)當。解決(jué)方法：調好(hǎo)柱溫，檢查是(shì)否有(yǒu)打開的(dí)窗(chuāng)戶或(huò)空調對著柱溫箱。
2，流動(dòng)相(xiāng)比(bǐ)例變化。解決方(fāng)法：檢(jiǎn)查(chá)四元泵(bèng)的比(bǐ)例(lì)閥是(shì)否(fǒu)有故(gù)障(zhàng)
3，色(sè)譜(pǔ)柱沒有平衡(héng)。解決方(fāng)法(fǎ)：在每(měi)一次運行(háng)之前(qián)給予足夠(gòu)的時間(jiān)平(píng)衡色譜(pǔ)柱
4，流速變(biàn)化。解決方(fāng)法(fǎ)：重新設(shè)定流(liú)速
5，泵(bèng)中有(yǒu)氣(qì)泡。解(jiě)決方法：，從泵(bèng)中(zhōng)除(chú)去氣泡
2.3 峰型(xíng)異(yì)常(cháng)問題 峰型問題是(shì)液相(xiāng)的(dí)主要(yào)問(wèn)題(tí)，在做(zuò)液(yè)相過程中(zhōng)，我們就(jiù)是要變(biàn)換不同的(dí)條件來改善不(bù)好的峰型，對於各(gè)種各(gè)樣(yàng)的(dí)異(yì)常(cháng)峰，要區(qū)別(bié)對待，從(cóng)主(zhǔ)要問題(tí)出發(fā)，一(yī)個一(yī)個(gè)加以(yǐ)解決(jué)。
1，色(sè)譜圖(tú)中(zhōng)未(wèi)出(chū)峰。解(jiě)決方法(fǎ)：係統未進(jìn)樣或樣品分(fēn)解(jiě)；泵未(wèi)輸(shū)液(yè)或流動相(xiāng)使用不正(zhèng)確；檢(jiǎn)測(cè)器設置不(bù)正確；針對(duì)以(yǐ)上情(qíng)況成因作相應(yīng)調整(zhěng)即可(kě)。
2， 一(yī)個(gè)峰(fēng)或(huò)幾個峰(fēng)是負峰。解(jiě)決方法(fǎ)：流動相(xiāng)吸收(shōu)本底高；進(jìn)樣(yàng)過(guò)程中(zhōng)進入(rù)空氣；樣(yàng)品組分(fēn)的(dí)吸收(shōu)低於(yú)流動相。
3， 所有峰均(jūn)為負峰。解(jiě)決方(fāng)法(fǎ)：信號(hào)電纜接反或(huò)檢測(cè)器輸(shū)出(chū)極性設置(zhì)顛(diān)倒(dǎo)；光學(xué)裝置(zhì)尚未達到平(píng)衡。
4，所有峰均為(wéi)寬峰。解決方法：係統(tǒng)未(wèi)達(dá)到平(píng)衡(héng)；溶解樣品(pǐn)的溶劑(jì)極性(xìng)比流動(dòng)相差(chà)很多；色(sè)譜柱尺寸及(jí)類型(xíng)選擇(zé)不(bù)正確；色譜柱或保(bǎo)護柱被汙(wū)染或(huò)柱(zhù)效(xiào)降低(dī)；溫度(dù)變化(huà)造成(chéng)的影(yǐng)響(xiǎng)。 ，
5，所(suǒ)出峰比(bǐ)預(yù)想(xiǎng)的小。解決(jué)方(fāng)法：樣(yàng)品(pǐn)黏度過大；進樣(yàng)品故障(zhàng)或(huò)進(jìn)樣(yàng)體積(jī)誤差(chà)；檢測(cè)器(qì)設置不正(zhèng)確．定量(liáng)環(huán)體(tǐ)積(jī)不正確；檢測(cè)池汙(wū)染(rǎn)；檢測器(qì)燈出(chū)現問題(tí)。
6，出(chū)現雙(shuāng)峰(fēng)或(huò)肩(jiān)峰。解決(jué)方(fāng)法(fǎ)：進(jìn)樣(yàng)量過大(dà)；樣品濃度(dù)過(guò)高(gāo)；保(bǎo)護柱或色譜柱(zhù)柱(zhù)頭堵(dǔ)塞；保(bǎo)護拄(zhǔ)或(huò)色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)汙(wū)染或(huò)失(shī)效(xiào)；柱塌陷或(huò)形成(chéng)短(duǎn)通(tōng)道(dào)。
7，前(qián)伸(shēn)峰。解(jiě)決方(fāng)法：進樣量或(huò)樣(yàng)品濃度高；溶(róng)解樣品(pǐn)的溶劑(jì)較流動相極性(xìng)強；保(bǎo)護(hù)柱(zhù)或色(sè)譜柱汙染(rǎn)或失(shī)效。
8，拖尾(wěi)峰。解(jiě)決方法(fǎ)：柱(zhù)超(chāo)載，降低(dī)樣(yàng)品(pǐn)量(liáng)；增加柱直徑(jìng)采(cǎi)用較高容量的(dí)固定相；峰幹擾(rǎo)，對(duì)樣(yàng)品進(jìn)行清潔(jié)過濾；調(tiáo)整(zhěng)流動相；矽(guī)羥基作(zuò)用(yòng)，加入三乙(yǐ)胺(àn)，用鹼(jiǎn)致(zhì)鈍化柱增加(jiā)緩衝(chōng)液(yè)或鹽的濃度(dù)降低(dī)流(liú)動(dòng)相pH值；柱(zhù)內(nèi)燒(shāo)結不(bù)鏽(xiù)鋼失效(xiào)，更(gēng)換燒結不(bù)鏽鋼(gāng)；加(jiā)在綫(xiàn)過濾器(qì)，對樣品進(jìn)行(háng)過濾；死體(tǐ)積(jī)或柱外體積(jī)過大，將連接點降至低；盡可能(néng)使用內(nèi)徑(jìng)較(jiào)細的連接管；柱效(xiào)下降，更換(huàn)柱子(zǐ)；采用(yòng)保護柱，對(duì)柱(zhù)子進(jìn)行再(zài)生(shēng)。
9，出(chū)現(xiàn)平(píng)頭峰。解(jiě)決(jué)方(fāng)法(fǎ)：檢測(cè)器設置不正(zhèng)確；進樣體積太(tài)大(dà)或(huò)樣(yàng)品濃(nóng)度太高。
10，出現(xiàn)鬼峰(fēng)。解(jiě)決方法：進樣閥(fá)殘餘峰(fēng)，在(zài)每次進完樣(yàng)後用(yòng)充足的時間來平衡和清洗(xǐ)係統；樣品(pǐn)中(zhōng)存(cún)在未(wèi)知物，改進(jìn)樣品(pǐn)的預處(chǔ)理；流動相汙(wū)染，更換新(xīn)流動(dòng)相，盡(jìn)可(kě)能(néng)現(xiàn)配現用，隔夜(yè)的(dí)流動(dòng)相(xiāng)再(zài)次(cì)使(shǐ)用時要(yào)過濾(lǜ)；盡(jìn)可(kě)能(néng)使用HPLC級試劑(jì)；流路(lù)中有小(xiǎo)的氣(qì)泡，打開Purge閥(fá)，加(jiā)大(dà)流(liú)速排除(chú)。
3 結語
以(yǐ)上內容隻(zhī)是對(duì)液相(xiāng)色譜中(zhōng)出現(xiàn)的(dí)常(cháng)見(jiàn)的(dí)問(wèn)題(tí)進行了(liǎo)分析(xī)，在故(gù)障(zhàng)排除時(shí)要遵(zūn)守(shǒu)以下(xià)原則(zé)：一次隻改變一個因素，確(què)定假定(dìng)因素與(yǔ)問題(tí)之(zhī)間(jiān)的(dí)聯(lián)係(xì)；如果通過更換組(zǔ)件來排查(chá)故障時要注意將(jiāng)拆下的(dí)完(wán)好(hǎo)組件裝回原(yuán)位，避(bì)免浪費(fèi)；這是成功進行(háng)故障(zhàng)排(pái)除(chú)的(dí)關鍵(jiàn)。總之(zhī)，在使(shǐ)用(yòng)高效(xiào)液(yè)相色(sè)譜(pǔ)時(shí)一定(dìng)要(yào)注(zhù)意樣品的前(qián)處理與儀器的正(zhèng)確操作和(hé)保(bǎo)養(yǎng)。
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